Протеаза Streptomyces sp. 12: очищення і властивості [Текст] / Н. А. Нідялкова [та ін.] // Мікробіологічний журнал. - 2017. - Том 79, N 2. - С. 33-47 MeSH-головна: СТРЕПТОМИЦЕТЫ -- STREPTOMYCES ПЕПТИД-ГИДРОЛАЗЫ -- PEPTIDE HYDROLASES (биосинтез) ХРОМАТОГРАФИЯ -- CHROMATOGRAPHY (методы) Анотація: Мета. Оптимізувати умови культивування Streptomyces sp. 12 для забезпечення максимального синтезу протеаз, одержати очищений препарат протеази, дослідити її субстратну специфічність, фізико-хімічні властивості та функціональні групи активного центру. Методи. Оптимізацію умов культивування за допомогою однофакторних експериментів проводили на базовому середовищі наступного складу(г/л): К[[d]]2[[/d]]НРО[[d]]4[[/d]] - 1; MgSО[[d]]4[[/d]] • 7 Н[[d]]2[[/d]]О; NaCl - 1: (NH[[d]]4[[/d]])[[d]]2[[/d]]SО[[d]]4[[/d]] - 2; CaCO[[d]]3[[/d]] - 2; крохмаль — 10; розчин солей мікроелементів (FeSO[[d]]4[[/d]] • 7Н[[d]]2[[/d]]О - 1, МnСІ[[d]]2[[/d]] • 4Н[[d]]2[[/d]]O - 1, ZnSO[[d]]4[[/d]] • 7Н[[d]]2[[/d]]O - 1) - 1 мл. Загальну казеїнолітичну (протеолітичну) активність визначали кількісно за тирозином, що утворюється при гідролізі казеїну під дією досліджуваного ензиму. Для виділення та очищення ензиму застосовували осадження (NH[[d]]4[[/d]])[[d]]2[[/d]]SO[[d]]4[[/d]] 90 % насичення, хроматографію на нейтральних та заряджених TSK- гелях. Результати. Встановлено, що оптимальними джерелами карбону, нітрогену і мінерального живлення в поживному середовищі є кукурудзяне борошно, (NH[[d]]4[[/d]])[[d]]2[[/d]]SO[[d]]4[[/d]] і СаСІ[[d]]2[[/d]], відповідно. При вирощуванні Streptomyces sp. 12 в глибинних умовах культивування протягом трьох діб в 200 мл оптимізованого поживного середовища при початковому значенні pH 7,0, температурі 37°С, швидкості обертання качалки 220 об/хв питома протеолітична активність становила 62,7 од·мг протеїнa[[p]]-1[[/p]], що в 4,8 рази вище в порівнянні з контролем (базове середовище). Фракціонуванням сульфатом амонію, гель-фільтраційною та іонообмінною хроматографією на TSK-гелях — Toyopearl HW-55, DEAE 650(М) і Sepharose 6В була отримана протеаза Streptomyces sp. 12 з питомою активністю 538 од·мг протеїнa[[p]]-1[[/p]] і виходом 35,8 %. Молекулярна маса протеази Streptomyces sp. 12 складала ?35,6 кДа. Показано, що ензим проявляє найвищу активність до колагену та меншу — до казеїну, альбуміну і желатину. Інгібування групоспецифічними реагентами виявило, що досліджувана протеаза є металопротеазою з оптимальними умовами дії на колаген при pH 8,0 і температурі 50°С. Висновки. Одержана протеаза Streptomyces sp. 12 з питомою протеолітичною активністю 538 од·мг протеїнa[[p]]-1[[/p]], що в 8,6 разів вище, ніж активність в супернатанті культуральної рідини. Дод.точки доступу: Нідялкова, Н. А. Варбанець, Л. Д. Шепелевич, В. В. Зелена, П. П. Юмина, Ю. М. Гаркава, К. Г. Трошина, Л. О. Вільних прим. немає