Preparation of highly-concentrated autologous platelet-rich plasma for biomedical use [Текст] = Приготування висококонцентрованої аутологічної плазми крові, збагаченої тромбоцитами, для біомедичного використання / V. Chernyshenko [та ін.] // The Ukrainian Biochemical Journal. - 2019. - Т. 91, № 2. - С. 19-28. - Bibliogr. at the end of the art. MeSH-головна: ТРОМБОЦИТОВ АКТИВАЦИЯ -- PLATELET ACTIVATION РАНЫ ЗАЖИВЛЕНИЕ -- WOUND HEALING ТРОМБОЦИТ-НАСЫЩЕННАЯ ПЛАЗМА -- PLATELET-RICH PLASMA КЛЕТОЧНАЯ И ТКАНЕВАЯ ТЕРАПИЯ -- CELL- AND TISSUE-BASED THERAPY (использование, методы, тенденции) Анотація: Cell therapy with platelets is a widely accepted approach for wound healing and tissue regeneration in medicine. However, with most available methods poorly concentrated platelet suspensions (up to 0.3∙10[[p]]6[[/p]] 1/µl) or suspensions of mostly inactivated or lost platelets are obtained. In this study, we aimed to develop a simple and effective method for preparing a suspension of native and resting platelets with over 1∙10[[p]]6[[/p]] 1/µl. Platelet-rich plasma (PRP) was obtained from fresh blood of healthy donors (n = 5) collected using different amounts of heparin as the anticoagulant. Samples of PRP were spun down and re-suspended in auto­logous blood plasma. Count and vitality of platelets in each sample were determined by aggregation study on the Solar AP2110 aggregometer. Platelet shape and cytoplasmic granularity that indicate the nativity of platelets were monitored on the COULTER EPICS XL Flow Cytometer. This study of aggregation of platelets in PRP obtained using various amounts of heparin allowed us to reduce final concentrations to the amount that effectively prevented clotting and did not affect platelet reactivi­ty (5 U/ml). PRP concentrated 5 times with a total concentration of cells of 1∙10[[p]]6[[/p]] 1/µl was able to be activated by adenosine diphosphate (ADP) (aggregation rate 54 ± 7%). The amount of cells with altered shape and granularity in concentrated suspension was not higher than 20%. This finding means that the platelets would still be able to release a number of growth factors and other biologically active compounds after stimulation or injection into tissue during cell therapy. The decrease in heparin concentrations also minimizes haemorrhage in the injection site supporting biomedical use of the suspension. A simple and effective method for preparation of highly-concentrated PRP (1.2∙10[[p]]6[[/p]] 1/µl) for biomedical use was developed. Aggregometry and flow cytometry proved that obtained platelets were resting and able to be activated. Being autologous, the preparation can be widely used for cell therapy without additional precautions Клітинна терапія з використанням тромбоцитів є широко поширеним підходом в медицині для загоєння ран і регенерації тканин. Однак, найдоступніші методи дають змогу отримати не достатньо концентровані суспензії тромбоцитів (до 0,3∙10[[p]]6[[/p]] 1/мкл) або суспензії тромбоцитів, що частково або повністю втратили свою активність. У цьому дослідженні ми поставили за мету розробити простий та ефективний метод приготування суспензії нативних та інтактних тромбоцитів у концентрації понад 1∙10[[p]]6[[/p]] 1/мкл. Збагачену тромбоцитами плазму крові (ЗТПК) отримували зі свіжої крові здорових донорів (n = 5), при заборі крові як антикоагулянт використовували гепарин. Зразки ЗТПК осаджували і ресуспендували в аутологічній плазмі крові. Кількість та життєздатність тромбоцитів у кожному зразку визначали шляхом дослідження агрегації на агрегометрі Solar AP2110. Форма тромбоцитів і гранулярність цитоплазми, які вказують на нативність тромбоцитів, контролювали на потоковому цитометрі COULTER EPICS XL. Дослідження агрегації тромбоцитів у ЗТПК, отриманій з використанням різних кількостей гепарину, дозволило нам знизити кінцеві концентрації до кількості, яка ефективно запобігала зсіданню крові і не впливала на активність тромбоцитів (5 U/мл). ЗТПК, сконцентрована в 5 разів із загальною концентрацією клітин 1∙10[[p]]6[[/p]] 1/мкл, була здатна до активації аденозиндифосфатом (AДФ) (ступінь агрегації 54 ± 7%). Кількість клітин зі зміненою формою та гранулярністю в сконцентрованій суспензії не перевищувала 20%. Ці дані свідчать, про те, що тромбоцити зберігають здатність вивільняти ряд факторів росту та інші біологічно активні сполуки після стимуляції або ін’єкції в тканини за клітинної терапії. Зниження концентрації гепарину до того ж мінімізує крововилив в місці ін’єкції, що сприяє біомедичному застосуванню суспензії. Розроблено простий та ефективний метод приготування високо концентрованої ЗТП (1,2∙10[[p]]6[[/p]] 1/мкл) для біомедичного використання. Агрегатометрія і протокова цитометрія довели, що одержані тромбоцити інтактні й здатні активуватися. Препарат, що є аутологічним, може бути широко використаний для клітинної терапії без додаткових запобіжних заходів Дод.точки доступу: Chernyshenko, V. Shteinberg, K. Lugovska, N. Ryzhykova, M. Platonova, T. Korolova, D. Lugovskoy, E. Вільних прим. немає