New monoclonal antibodies to the Chlamydia trachomatis main outer membrane protein and their immunobiological properties [Текст] = Нові моноклональні антитіла до основного протеїну зовнішньої мембрани Chlamydia trachomatis та їх імунобіологічні властивості / O. Yu. Galkin [та ін.] // The Ukrainian Biochemical Journal. - 2019. - Т. 91, № 3. - С. 90-98. - Bibliogr. at the end of the art.
MeSH-головна:
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ МЕТОДЫ -- IMMUNOENZYME TECHNIQUES (использование, тенденции)
МОЧЕПОЛОВАЯ СИСТЕМА -- UROGENITAL SYSTEM (микробиология, патофизиология)
CHLAMYDIA TRACHOMATIS -- CHLAMYDIA TRACHOMATIS (патогенность, ультраструктура)
АНТИТЕЛА МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ -- ANTIBODIES, MONOCLONAL (анализ)
ХЛАМИДИОЗЫ -- CHLAMYDIACEAE INFECTIONS (диагностика, патофизиология, этиология)
ЭПИТОПОВ КАРТИРОВАНИЕ -- EPITOPE MAPPING (методы, статистика, тенденции)
ТАБЛИЦЫ -- TABLES
Анотація: One of the methods that have been widely used in the diagnosis of urogenital chlamydia is an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), the use of which allows for differential diagnosis. In order to increase the efficiency of ELISA test kits production, for the kits for the diagnosis of urogenital chlamydia, based on the principle of indirect modification, following synthetic positive controls (PCs) can be used: a conjugate of IgM (IgA) normal immunoglobulins and monoclonal antibodies (McAbs) to C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP). The goal of this work was to obtain high active and affinity McAbs to the C. trachomatis MOMP as well as the study of its immunobiological properties which are important for future biochemical approaches. The study was conducted using: polyclonal antibodies (PcAbs) to C. trachomatis; recombinant major outer membrane protein (MOMP) (191-354 a.r.; W4-W5); epitope mapping based on phage display technology. The original set from 16 clones of hybridomas, producers of McAbs to the C. trachomatis MOMP has been obtained. More than half of the tested McAbs (8 out of 14) were characterized by a rather high titer (≥1:800), and three of them had a titer of ≥1:1600. In general, the McAbs titer was correlated with the value of the affinity constant: McAbs with higher titles were characterized by a high value of the affinity constant. For McAbs with a titer of 1:800, the average Ka is 5.2×10[[p]]9[[/p]] M-[[p]]1[[/p]], while for McAbs with a titer ≥1:800 – K[[d]]a[[/d]]
Одним із методів, який знайшов широке застосування в діагностиці урогенітального хламідіозу, є імуноензимний аналіз (ІЕА), застосування якого дозволяє проводити диференціальну діагностику. Для підвищення ефективності виробництва ІЕА наборів, тих, що призначені для діагностики урогенітального хламідіозу та побудовані за принципом непрямого аналізу, можна застосовувати такі синтетичні позитивні контролі (ПК): кон’югати нормальних імуноглобулінів IgM (IgA) з моноклональними антитілами (McAbs) до основного протеїну зовнішньої мембрани Сhlamydia trachomatis (MOMP). Метою цієї роботи було одержання високоактивних та специфічних McAbs до С. trachomatis MOMP, а також вивчення їхніх імунобіологічних властивостей, важливих для майбутнього біохімічного застосування. Дослідження проводили з використанням: поліклональних антитіл (PcAb) до С. trachomatis; рекомбінантного основного зовнішнього мембранного протеїну (MOMP) (191-354 a.з.; W4-W5); епітопного картування на основі технології фагового дисплея. Було одержано оригінальний набір із 16 клонів гібридоми, продуцентів McAb до С. trachomatis MOMP. Більше половини досліджених McAb (8 із 14) характеризувалися доволі високим титром (≥ 1:800), а три з них мали титр ≥ 1:1600. Загалом титр McAb корелював зі значенням константи афінності: McAb із вищим титром характеризувалися високим значенням константи афінності. Для McAb із титром 1:800 середнє значення K[[d]]а[[/d]] становило 5,2×10[[p]]9[[/p]] М[[p]]-1[[/p]], у той час як для McAb із титром ≥ 1:800 – K[[d]]а[[/d]] дорівнювало 10,7×10[[p]]9[[/p]] М[[p]]-1[[/p]]. Встановлено здатність п’яти McAb одержаної панелі конкурувати з поліклональними антитілами сироватки осіб, інфікованих C. trachomatis, що може обумовлювати потенційну протективну активність цих антитіл. Разом із тим, два McAb не виявляли вираженої конкуренції з поліклональними антитілами. Для трьох найбільш афінних моноклональних антитіл проведено визначення абсолютної епітопної специфічності з використанням технології фагового дисплея. Антигенні детермінанти двох McAb 293F4 та 291F8, що активно конкурували із PcAb, представлено двома лінійними послідовностями 320-325 а.з. та 326-330 а.з. відповідно. Епітоп, з яким взаємодіє McAb 296G2, представлений лінійною послідовністю 347-352 а.з. McAb 296G2 не виявляло активної конкуренції щодо PcAb сироватки. Одержана сукупність даних дає змогу обрати McAb для використання у ПК IEA-наборів для виявлення IgA/IgM-антитіл до C. trachomatis
Дод.точки доступу:
Galkin, O.Yu.
Besarab, O. B.
Gorshunov, Yu. V.
Ivanova, О. M.
Вільних прим. немає
|