Сайт-направленный мутагенез остатков триптофана в структуре каталитического модуля тирозил тРНК синтетазы Bos taurus / В. Н. Заец [и др.] // Цитология и генетика. - 2019. - Том 53, N 3. - С. 47-57 MeSH-головна: ТИРОЗИН-ТРНК-ЛИГАЗА -- TYROSINE-TRNA LIGASE (генетика) РНК ТРАНСПОРТНАЯ ТРИПТОФАН-СПЕЦИФИЧНАЯ -- RNA, TRANSFER, TRP (генетика) МУТАГЕНЕЗ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИЙ -- MUTAGENESIS, SITE-DIRECTED (методы) Анотація: Для исследования структурно-динамических и функциональных свойств N-концевого каталитического модуля тирозил-тРНК синтетазы Bos taurus (мини BtTyrRS) методами флуоресцентной спектроскопии проведен сайт-направленный мутагенез белка по модифицированному методу QuikChang с заменой трех остатков Trp на Ala в его структуре. В процессе последовательных реакций ПЦР с использованием разработанных праймеров получены точечные замены кодонов триптофана TGG на кодоны аланина GCG в нуклеотидной последовательности кДНК каталитического модуля тирозил-тРНК синтетазы, клонированной в экспрессирующей плазмиде pET-30a. В результате получены кДНК мини BtTyrRS, в последовательности которых имеется лишь один кодон триптофана в каждом из трех положений в структуре белка Для дослідження структурно-динамічних і функціональних властивостей N-кінцевого каталітичного модуля тирозил-тРНК синтетази Bos taurus (міні BtTyrRS) методами флуоресцентної спектроскопії проведено сайт-спрямований мутагенез білка за модифікованим методом QuikChang з заміною трьох залишків Trp на Ala в його структурі. В процесі послідовних реакцій ПЛР з використанням розроблених праймерів отримані точкові заміни кодонів триптофана TGG на кодони аланіна GCG в нуклеотидній послідовності кДНК каталітичного модуля тирозил-тРНК синтетази, клонованої в експресуючій плазміді pET-30a. В результаті отримані кДНК міні BtTyrRS, в послідовності яких є лише один кодон триптофану в кожному з трьох положень в структурі білка To study the structural-dynamic and functional properties of the N-terminal catalytic module of Bos taurus tyrosyl-tRNA synthetase (mini BtTyrRS) by fluorescence spectroscopy site-directed mutagenesis of the protein with the replacement of three Trp residues with Ala residues in its structure was performed using the modified QuikChang method. In the process of sequential PCR reactions using the developed primers point substitutions of tryptophan codons TGG with alanine codons GCG were made within the cDNA sequence of the tyrosyl-tRNA synthetase catalytic module cloned in the expression plasmid pET-30a. As a result, mini BtTyrRS cDNAs were obtained within the nucleotide sequence of which there is only one codon of tryptophan in each of the three positions in the protein structure Дод.точки доступу: Заец, В. Н. Цуварев, О. Ю. Коломиец, Л. А. Корнелюк, А. И. Вільних прим. немає