Kushkina, A. I. Morphological biodiversity of bacteriophages from lysed batch culture of recombinant Escherichia coli BL21 (DE3) [Text] / A. I. Kushkina, F. I. Tovkach // Мікробіологічний журнал. - 2020. - Том 82, N 4. - P80-93 MeSH-головна: БАКТЕРИОФАГИ -- BACTERIOPHAGES (классификация, химия) ESCHERICHIA COLI БЕЛКИ -- ESCHERICHIA COLI PROTEINS (химия) ХРОМАТОГРАФИЯ ИОНООБМЕННАЯ -- CHROMATOGRAPHY, ION EXCHANGE (методы) БИОТЕХНОЛОГИЯ -- BIOTECHNOLOGY (методы) Анотація: Спорадичні фагові інфекції бактеріальних культур широко розповсюджені і завдають значних економічних збитків біотехнологічним виробництвам. Всебічні дослідження таких випадків фагових інфекцій мають не тільки практичне, але й теоретичне значення. Мета. Було виявлено, що фагова популяція, яка знищила періодичну культуру промислового рекомбінантного похідного штаму E. coli BL21(DE3) була атенуйованою. Це проявлялось в здатності до утворення бляшок типу «укола голкою», які не розмножувались в наступних пасажах. В зв’язку з цим метою представленого дослідження було оцінити біорізноманіття та можливі дефекти в структурі віріонів атенуйованої фагової популяції до етапу ізолювання чистої фагової лінії. Методи. Аніонообмінна хроматографія була обрана основним методом для очистки, концентрування, розділення часток фагового ізоляту об’ємом 5 літрів, одержання високоякісних препаратів фагових віріонів, а також для одержання порівняльних профілів фагових популяцій на основі поверхневого заряду віріона. Морфологія фагових часток визначалась з використанням просвічуючої електронної мікроскопії. Модальні розміри віріонів визначали за допомогою статистичної обробки даних. Ідентифікацію фагових ДНК проводили з використанням рестрикційного аналізу, розміри фагових віріонних ДНК визначали за допомогою пульс-форетичного розділення. Результати та висновки. Досліджений фаговий ізолят складався з суміші двох фагів, які належать до родин Myoviridae (A2-морфотип) та Siphoviridae (B-морфотип). За рестрикційним аналізом основну частину фагового пулу (біля 99% всіх віріонів) було ідентифіковано як первинну популяцію міофага Lw1. Ця популяція мала своє власне внутрішньо-популяційне біорізноманіття (гетерогенність) і складалась з однієї основної і двох мінорних субпопуляцій, які розрізнялись за розміром та формою капсиду. Субпопуляція ІІІ складалась з віріонів з аберантними бочкоподібними капсидами (трипролатні капсиди, розширються в обидва боки) з низьким коефіцієнтом елонгації. Дод.точки доступу: Tovkach, F. I. Вільних прим. немає |