Рекомбинантная синтетаза цефалоспоринов-кислот: оптимизация экспрессии в клетках е.coli, иммобилизация и использование для биокаталитического синтеза цефазолина [Текст] / М. А. Эльдаров [и др.] // Биомедицинская химия. - 2015. - Вып. 5. - С. 646-651 . - ISSN 0042-8809 MeSH-главная: ESCHERICHIA COLI -- ESCHERICHIA COLI (действие лекарственных препаратов) ЦЕФАЗОЛИН -- CEFAZOLIN (терапевтическое применение) ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОЦЕНКА -- DRUG EVALUATION Аннотация: Синтетаза цефалоспоринов-кислот (cephalosporin-acid synthetase, CASA) специфична к синтезу цефалоспоринов-кислот; продукция этого фермента в клетках Escherichia coli сопровождается накоплением непроцессированного нерастворимого предшественника. Для оптимизации условий продукции рекомбинантной CASA изучали эффекты таких параметров культивирования штамма-продуцента как состав питательной среды, посевная доза, температура культивирования. Для совершенствования вектора экспрессии CASA были созданы дополнительные конструкции для продукции варианта CASA с сигнальной последовательностью L-аспарагиназы Ei-winia carotovora (ansCASA) и "безлидерного" варианта CASA. Удаление N-концевой сигнальной последовательности на порядок снижало уровень продукции функционально активной CASA и подавляло рост штамма. Введение сигнальной последовательности L-аспарагиназы повышало удельную активность фермента в полученном штамме. С использованием продуцента ansCASA разработан метод иммобилизации рекомбинантного фермента на макропористом акрилатном носителе, содержащем активные эпоксигруппы. Полученный биокатализатор обеспечивал высокоэффективный синтеза цефазолина (ЦЕЗ) из 3-[(5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-тиометил]-7-аминоцефалоспорановой кислоты (ММТД-7-АЦК) и метилового эфира 1(Н)-тетразолилуксусной кислоты (МЭТЗУК), в мягких условиях достигнута степень трансформации ММТД-7-АЦК в ЦЕЗ 95%. Доп.точки доступа: Эльдаров, М. А. Скляренко, А. В. Думина, М. В. Медведева, Н. В. Жгун, А. А. Сатарова, Д. Э. Сидоренко, А. И. Епремян, А. С. Яроцкий, С. В. Свободных экз. нет