Вид документа : Статья из журнала Шифр издания : Автор(ы) : Ivanenko T. V., Abramov A. V. Заглавие : Optimization of endocrine pancreas fluorescence analysis using machine methods Место публикации : Патологія. - Запоріжжя, 2022. - Т. 19, N 1. - С. 24-31 (Шифр ПУ40/2022/19/1) MeSH-главная: ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА -- PANCREAS МИКРОСКОПИЯ ФЛЮОРЕСЦЕНТНАЯ -- MICROSCOPY, FLUORESCENCE ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ -- FLUOROIMMUNOASSAY Аннотация: Мета роботи – встановити оптимальні параметри інтенсивності, тривалості безперервного УФ-випромінювання на фотодинамічне знебарвлення досліджуваних тканин підшлункової залози, а також на співвідношення інтенсивності корисного сигналу в зоні дослідження флуоресценції та інтенсивності неспецифічної флуоресценції фону.Матеріали та методи. Підшлункову залозу трьох дорослих щурів лінії Wistar фіксували в розчині Буена (20 годин) і за-ливали в парапласт після стандартної гістологічної обробки. Дослідження здійснили на парафінових зрізах підшлункової залози, в яких імунофлуоресцентним методом визначали інсулін і глюкагон у панкреатичних острівцях за допомогою антитіл виробництва Santa Cruz Biotechnology. Реакцію імунофлуоресценції вивчали на мікроскопі AxioImager-M2. Для зйомки флуоресценції використали систему аналізу цифрових зображень AxioVision, а для кількісного аналізу зображення – систему аналізу зображень ImageJ. Проаналізували 30 панкреатичних острівців площею 3000–5000 мкм2 (8–13 % площі кадра).Результати. Вимірювання, здійснені при постійних величинах концентрації гормонів в ендокриноцитах, показали різну оцінку середньої інтенсивності флуоресценції для інсуліну та глюкагону, що залежала від інтенсивності УФ радіації. З посиленням дії УФ радіації середня інтенсивність флуоресценції для інсуліну та глюкагону збільшувалась, але внаслідок корекції експозиції камери ставала майже однаковою. Незалежно від цього інтенсивність неспецифічної флуоресценції фону монотонно зростала. Використання в розрахунках відношення логарифмів флуоресценції фону препарату та флуоресценції ендокриноцитів дає стійку оцінку відносної концентрації гормонів, що не залежить від інтенсивності обраного режиму УФ радіації, а також від тривалості УФ опромінення препарату. Це дає змогу нівелювати ефект фотодинамічного знебарвлення препарату, спричиненого безперервним УФ опроміненням. Методи машинного виділення ділянки інтересу різними алгоритмами програми ImageJ дають різну оцінку її площі, інтегральної та середньої величини флуоресценції. Результат, наближений до «ідеального» інтерактивного способу виділення ділянки інтересу для інсуліну та глюкагону, показав метод сегментації Оцу.Висновки. Під час імунофлуоресцентного дослідження підшлункової залози слід обирати помірний режим УФ радіації, корегувати експозицію CCD камери перед кожним кадром, а загальний час дослідження поля зору зразка обмежити 1–2 хвилинами. Для виділення ділянки дослідження інсуліну та глюкагону під час автоматичного аналізу рекомендо-вано застосовувати алгоритм Оцу. Для отримання кількісної оцінки середньої інтенсивності флуоресценції у сфері дослідження рекомендоване використання в розрахунках відношення логарифмів флуоресценції фону препарату та ендокриноцитів. Доп.точки доступа: Abramov, A. V.